کلونینگ و بیان نوع نوترکیب پروتئین np آنفولانزا
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده علوم پایه
- نویسنده سمیه توکلی
- استاد راهنما مژگان بنده پور
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1391
چکیده
در این تحقیق ژن np با استفاده از سایت www.encorbio.com/protocols/codon.htm به گونه ای طراحی شده است که حاوی نوکلئو تیدهای تغییر یافته مناسب میزبان ( e.coli) باشد. توالی ژن از طریق شرکت ندای فن سنتز گردید . ساب کلونینگ np در pet-22b: ابتدا ژن np و وکتور pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برش داده شده و ژن np از pge-vector خارج گردید.سپس وکتور و ژن فوق در واکنش ligation وارد گردیده و در e.coli سویه top 10 ترانسفورم گردیدند. کلونهای مختلف پس از استخراج پلاسمید با برش با آنزیمهای noti و hindiii و pcr برای داشتن اینسرت غربال گردیدند. بیان ژن np در e.coli : برای بیان ژن در e.coli ازسلول bl21 استفاده گردید. برای این منظور پلاسمید نوترکیب pet-22b/np در سلول bl21 ترانسفورم گردیده پس از کشت بیان پروتئین با افزودن iptg القا گردید. سلولها سپس در ساعات مختلف جمع آوری گردیده و بیان پروتئین از طریق الکتروفورز در ژل sds-page آنالیز گردید. وسترن بلاتینگ: پروتئین بیان شده در ژل sds-page الکتروفورز گردیده و با روش وسترن بلاتینگ به غشاء نیتروسلولز منتقل گردید. این غشا سپس با آنتی بادی پلی کلونال علیه his tag انتهای c پروتئین مجاور گردیده و واکنش با آنتی ژن موجود در غشا از طریق مجاور کردن آن با آنتی بادی ضد igg موش کونژوگه با پراکسیداز و سوبسترای dab مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: ساب کلونینگ np در pet-22b: با توجه به پیش بینی جایگاههای برش آنزیمی، از برش آنزیمی ژن np / pge-vector و وکتور بیانی pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برای کلونینگ استفاده گردید. کلونهای حاوی اینسرت بوسیله هضم با آنزیمهای noti و hindiii شناسایی گردیدند. . با توجه به اینکه ژن np bp 1500می باشد، انتظار داریم در صورت کلونینگ صحیح قطعه ای حدود bp 1500 از پلاسمید جدا شود. برای اطمینان کامل از وجود np در پلاسمید pet-22b، ساختار pet 22b-np با pcr تائید گردید. بیان ژنnp در : e.coli برای بیان ژن np ویروس آنفولانزا ، سازه ژنی pet 22b-npدر سلول بیانی bl21 ترانسفورم گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردید. نتایج آزمایش فوق نشان داد که سازه ژنی فوق قادر به ابراز میزان بالایی از پروتئین np است که بصورت باندی قوی در نمونه های پس از القا در ژل sds-page دیده می شود وسترن بلاتینگ: در این آزمایش واکنش بین آنتی بادی و آنتی ژن به صورت یک با ند 60 کیلو دالتونی مربوط به پروتئین np در نمونه القا شده با iptg پس از گذشت 5 ساعت از زمان القا ظاهر گردید که نمونه کنترل فاقد آن بود.
منابع مشابه
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25
Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...
متن کاملکلونینگ و بیان اریتروپویتین نوترکیب انسانی در Leishmania tarentolae
زمینه و هدف : پروتئین اریتروپویتین انسانی هورمونی گلیکوزیله با وزن مولکولی 40 کیلو دالتون است که در کلیه سنتز شده و در تکثیر و تمایز اریتروسیت‌ها نقش دارد. این پروتئین دارویی با نام تجاری «اپویتین» شناخته شده و کاربرد موثری در درمان آنمی، سرطان و عفونت‌های ناشی از HIV ایفاء می‌کند. این مطالعه به منظور ارزیابی استفاده از میزبان انگلی لیشمانیا تارانتولا (Leishmania tarentolae) به منظور تولید فرم ...
متن کاملکلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD
Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...
متن کاملتکثیر ،کلونینگ و بیان ژن نوترکیب bp26( omp28 )باکتری B. Melitensisجدا شده از استان مرکزی و تخلیص پروتئین BP26
مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران B. melitensis بوده و پروتئین BP26 این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتئین BP26 نوترکیب از باکتریB. Melitensis توسط وکتور بی...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی
زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده علوم پایه
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023